森貝伽生物：細胞凍存注意事項

轉眼就要到我們的第73個國慶節啦，我們科研人在過節之前還需要把我們的細胞們提前凍存休眠后才能安心過節，這樣就可以保證我們實驗室的空間最大程度被利用，節省細胞科研成本，也保證了實驗的一致性以及整體實驗的連貫性。

細胞凍存是目前細胞培養中最常見的細胞保存方式。將細胞消化后放置在細胞凍存液中，通過程序降溫盒放置在-80℃超低溫冰箱中過夜后放置在-196℃液氮中凍存，可以讓細胞停止生長從而起到保存細胞特性的效果，再假期結束后再重新復蘇用于實驗，也可以在培養到一定代次后長期凍存一定數量的細胞，保證后續細胞留種。

細胞凍存一般是我們實驗的最后一步，但是越到最后一步我們越不能掉以輕心，如果凍存步驟出現失誤就會影響到下一代細胞實驗的整體效果，甚至導致細胞提前老化死亡。

那接下來我們就開始好好了解一下細胞凍存這件事兒吧。

液氮保存細胞的原理

細胞是構成生命體的基本結構和功能單位，所以細胞會不斷代謝，代謝過程需要有各類蛋白酶參與，當低于-70℃時蛋白酶就會停止工作，從而通過超低溫貯存就可以使細胞們停止代謝活動，進入休眠狀態，以便于長期保存。

在細胞凍融中產生的冰晶會對細胞造成損傷，所以我們需要在凍存時加入我們的細胞凍存液（BC-CFM-01-100ML），用科學的力量盡可能的保護我們的細胞。

編輯搜圖

在前文（復蘇篇）中我們提到細胞需要“慢凍快融”。在細胞凍存時我們需要盡可能地保證細胞的程序降溫。目前常見的操作方法一般分為手動降溫和程序降溫兩種。

手動降溫方法：將細胞凍存管妥善放置在4℃存放30min后放置在-20℃存放60min再次將凍存管存放在-80℃冰箱中過夜，次日移入-178℃液氮中保存。

程序降溫方法：將細胞凍存管放置在容器中，其中填充滿異丙醇，直接放置在-80℃超低溫冰箱中，從而可以保證其內部能夠以-1℃/min的速度進行程序降溫至-80℃，然后轉移至-178℃液氮中儲存。

程序降溫盒可以保證每個梯度的勻速降溫，相較于手動降溫可以更加便捷并且更加精準，如果細胞較脆弱或是較珍貴時建議使用程序降溫盒降溫。

注意事項TIPS

1. 全程需嚴格無菌操作；

2. 細胞較脆弱，吹打細胞過程需輕柔；

3. 每次移液后需要更換槍頭，避免造成溶液交叉污染；

4. 胰酶消化時間久會加速細胞老化，需嚴格控制消化時間；

5. 操作液氮時需要做好完全防護措施，避免直接接觸到液氮造成傷害；

6. 細胞凍存液在常溫下具有毒性，細胞凍存管配置好后需要盡快移入冰箱。